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1. 운반체로서의 plasmid란 무엇인가?
2. 분자유전학적 관점에서의 plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, I
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Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
Ligation & Transformation
4.18.
Agarose gel electrophoresis & Confirm the plasmid DNA
4.25. 1. Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
2. Enzyme digestion & Gel
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enzyme digestion을 하되, 이 방법이 사용 불가능할 경우는 single digestion 방법을 사용하시오. enzyme 선택의 이유도 제시하시오.
4. Transformation 후, screening 과정을 거처 bacterial colony로부터 plasmid를 추출했을 때, 이 recombinant DNA가 제대로 된 insert를 가
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enzyme)
3) DNA ligation과 T-vector를 이용한 PCR product의 cloning
Ⅲ. 유전자가 삽입된 DNA를 세포 내로 주입
1) Transformation
2) 항생제와 LacZ를 이용한 seletion
※ 항생제를 이용한 selection
LacZ를 이용한 color selection
Ⅳ. 올바른 clone 선택
1) Plasmid DNA
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Plasmid DNA의 추출과 Restriction enzyme에 대한 결과를 동시에 확인할 수 있는 실험이었습니다. 1. 완충액(Buffer)의 조제 (0.05M 구연산 완충액)
2. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
3. Plasmid purification by spin column (Miniprep)
4. Plasmid DNA digestion by R
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기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p748 Abstract
Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Discussion
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DNA 분리특성」, 한국식 품과학회지 Vol.31, No.1, 도정룡, 오세육저, 한국식품과학회, 1999, p110-114.
-http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=hRLCh+1aFbi3Sk8wm 5HOWnbPLZGgytYq&qb=RE5BwMcgwaS3riDD+MGk
-http://blog.naver.com/reframan?Redirect=Log&logNo=40029466494
-http://www
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DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
1㎕
5' primer
1㎕
3' primer
1㎕
DW
17㎕
total
20㎕
< R E F E R E N C E >
1) Gene cloning and DNA analysis An Introduction, T.A.Brown, Fourth Editi
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