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냉장고에 보관해둔 후 뒷분반이나 다음 조에
서 사용할 수 있게 한다. 그리고 액체배지는 만들어서 식힌 후 바로 사용한다.
7. Autoclave하는 중간에 꼭 transformation을 한다.
8. 결과 작성은 실험한 다음날 사진 찍거나 그림을 그려서 붙인다.
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후, Plasmid DNA 뽑아 Ligation이 제대로 되었는지 Enzyme cutting을 통해 확인한다. 형질전환이란 외부 DNA를 반응능이 있는 세포(competent cell)에 넣는 것
반응능이 있는 세포(Competent cell)
Competent cell의 제조방법
DH5α
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DNA 발견
1944
Avery McLeod McCarty
DNA 유전물질임을 확인
1953
Watson Crick
DNA 구조결정
1966
Nirenberg Khorana
유전암호의 해독
1972
Berg
재조합 DNA 실험
1973
Cohen Boyer
Plasmid사용 클로닝 1.유전공학의 정의
2.유전공학의 역사
3.최근 유전
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플라스미드와 상관관계가 있다. 이 플라스미드에서 제한효소부위는 보존되지 않지만, 대형 플라스미드는 서로 상당한 DNA 상동성을 갖고 있다. 플라스미드가 없는 EIEC는 비침입성이지만 S. flexneri의 대형 플라스미드는 침입성을 갖고 있다.
이
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DNA를 세포 내로 도입하여 복제하는데 사용되는 것으로 클로닝 벡터라고 한다. 특히 박테리아 플라스미드는 몇 가지 장점이 있기 때문에 클로닝 벡터로 널리 사용된다.
참고문헌 - 한국생물공학회편 생물공학실험서 p.112~113
민경희저 대학미생
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DNA가 식물체의 염색체에 삽입되는 효율을 조절한다는 보고가 있다.
결론
이와 같은 Agrobacterium의 Ti 플라스미드를 이용한 식물형질전환 실험에는 아주 흥미로운 성공사례들이 있다. 즉 반딧불의 발광 반응에 관여하는 효소를 만드는 유전자를
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DNA suffling과 screening 시행.
- 변종의 경우B-galactosidase보다 B-glucuronidase의 활성이 더 좋음.
- 14개의 핵산 부위에 돌연변이 일으킴.
- 10개의 amino aicd가 바뀜.(S193N T266A Q267R V411A D448G G466A L527I M543I Q626R Q951R)
- 이 mutants의 protein을 발현 정제 하여 W.t
Abzy
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DNA의 성질을 이용하여 유전자 클로닝을 통해 원하는 단백질을 대량으로 생산해 낼 수 있다. 유전자 클로닝의 과정을 정리하면 다음과 같다.
① 두 종류의 DNA, 즉 벡터로 사용할 박테리아 플라스미드와 외래 DNA를 분리한다.
② 플라스미드와 외
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균이라면 plasmid가 들어가지 않아도 blue colony를 형성해야 한다. 그래서 실험실에서 사용하는 균주는 거의가 Lac operon이 망가진, 위와 같이 omega fragment만을 만들 수 있는 mutant를 사용하는 것이다. 1) Plasmid의 구성
2) LacZ를 이용한 color selection
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DNA사슬의 특정 염기배열부위를 절단하는 효소를 제한효소라 하고, 같은 제한효소로 절단된 2종의 DNA사슬은 절단면의 구조가 상보적이며, 이들이 결합해 형성된 분자를 재조합DNA라 한다. 유전자DNA와 세포질에서 자기증식하는 플라스미드DNA
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