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-20℃에서 15∼30 min 정도 정치한다. 다시 5 min 정도 원심분리한다.
8. 상등액을 제거하고 pellet이 마를 때 까지 진공상태로 정치한다.
9. 50㎕ TE buffer에 pellet을 녹여 보관한다.
reference
분자미생물학실험실(MMlab)
http://ynucc.yu.ac.kr/~mmblab/5-5.html
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Plasmid를 다른 Bacteria에 감염시킬 수 있고, 이를 이용해 유전형질을 쉽게 변환시킬 수 있으며, 순수하게 분리, 정제하기도 쉽기에 Plasmid는 분자생물학에서 가장 널리 사용되는 유용한 도구 1. 실험목적
2. DNA Purification 원리
3. DNA Purificatio
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대장균에 plasmid DNA를 넣는 방법으로는 chemical method이 있는데 Chemical method는 보통 CaCl2를 사용하여 대장균 세포막의 DNA 투과성을 증가시키는 방법이다. 전기영동으로 알아보는 뿐만 아니라 이렇게 실험해서 결과를 알아보고싶다.
원심분리기에
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목차
1. 서 론
2. 실험 방법
2.1. LB Agarose 배지와 LB Broth 제조 및 멸균
2.2. LB-Ampicilin 첨가
2.3. E. coli JM109 (pGEM-T-Easy-DXS, pBlueScript-KS(+)) 접종
2.4. Plasmid 분리
2.5. 제한 효소 절단
2.6. Agarose Gel 제작
2.7. 전기영동 및 DNA 확인
3. 결과
3.1. E. c
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I. 실험 목표
Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. 본 실험은 다양한 실험에 필요한 plasmid DNA만을 얻는 mini-prep 실험을 진행하고, nanodrop 기기를 통해 정제한 plasmid DNA sample의 순도를 측정하는 것을 목표
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DNA
Introduction : 전기영동
1.전기영동...
2. 전하에 미치는 pH의 영향
3. 전기영동의 기법
Method
Subject Small-scale Preparations of Plasmid DNA
Introduction : 플라스미드
DNA 클로닝: 공여체 DNA를 다량 복제하는 것
DNA 재조합 과정
Material
Sub
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plasmid DNA와 염색체 DNA간에 구조적 차이에 기인하여 plasmid DNA만을 분리하는 방법이다.
이번 실험에서 사용한 Agrobacterium은 토양미생물로서 자신의 특정부위 유전자를 식물세포로 이동시키는 능력을 가지고 있다. Agrobacterium은 Ti플라스미드라고
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실험 중 침 등의 외부의 물질이 들어가서 순도가 정확하게 나오지 않았을 확률이 있다.
농도를 줄이고 protein과 RNA 등의 이물질 제거를 더 확실하게 한다면 더 정확한 결과를 얻을 수 있을 것으로 기대할 수 있다.
7. Reference
- 실험 수업 교재
- Ca
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Plasmid DNA 4㎕
37\'C incubator에서 1시간 반응 후
10x loading buffer (2㎕)를 사용하여 전기 영동
5.실험 결과
6.고찰
이번 실험을 통하여 PCR을 통한 Gene cloning을 배웠다.
Gene cloning으로 DNA을 자르고 붙이고 변형시켜서 실험에 필요한 재조합 recombinant DNA을
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plasmid DNA를 분리하는 방법을 익히고, 전기영동의 원리에 대해 알아보고 실험해보며, DNA정량 하는 법을 배운다.
Plasmid DNA 분리는 주로 miniprep라 부르는 방법으로 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. Plasmid 정제는 total cell DNA의 일반적인 분리방
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