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DNA가 많은 양의 EtBr과 결합하게 되어 더 잘 관찰 할 수 있게 된다.
같은 DNA이지만 이동속도에 차이가 생긴 이유
- Supercoiled(closed circular) DNA와 open circular DNA
세포(대장균)로부터 분리한 plasmid DNA 를 전기 영동하게 되면 오른쪽 사진과
같은 결과
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Purification of the PCR Product (Amplified from λ DNA)
3. GE of the PCR Product & the Purified PCR Product
4. RE-digestion of the Purified PCR Product and a Cloning Vector
5. Ligation of the Digested DNAs
6. Preparation of Competent Cells & Transformation
7. Culture of Recombinants & Miniprep o
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DNA분리
3) Polymerase Chain Raction(PCR)
* PCR에서 필요한 재료
* PCR 의 원리
① DNA의 변성(denaturation)
② Primer의 결합(annealing)
③ DNA의 합성(polymerization)
4) PCR의 산물의 전기영동(electrophoresis)
PCR product purification
Ⅱ. 얻은 유전자를 vector에 삽입
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Plasmid DNA의 추출과 Restriction enzyme에 대한 결과를 동시에 확인할 수 있는 실험이었습니다. 1. 완충액(Buffer)의 조제 (0.05M 구연산 완충액)
2. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
3. Plasmid purification by spin column (Miniprep)
4. Plasmid DNA digestion by R
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Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
Ligation & Transformation
4.18.
Agarose gel electrophoresis & Confirm the plasmid DNA
4.25. 1. Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
2. Enzyme digestion & Gel
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of Molecular Biology fourth edition // p42-43 denaturation
전문진 // 2003년 8월 20일 // 현대의 생물공학과 생명공학 // p 69-71 PCR의 기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 20
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DNA라도 초나선구조는 표면적이 작기 때문에 전기영동에서 빨리 이동하고 선형구조는 초나선에 비해 표면적이 크므로 늦게 이동하기 때문이다. 본 실험에서는 똑같은 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리 한것과 하지 않을 것을 사용하였으므로
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의 밴드만 나타냈기에, 따라서 자식 오염주는 4번이다.
또한 멜론 샘플들의 순도는 80%임을 알 수 있었고, 멜론 종자의 순도검정시 DNA mar
ker를 이
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