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1. 실험목적 : Plasmid의 정제과정을 배우고 직접 실험을 통해 학습 하기 위해서 실험을 진행한다.
2. 실험장비 및 시약 : Micro tube, Sol.1, Sol.2, Sol.3용액, Rack, Pipet, Centrifuge, Washing용액, Ilution buffer ,Column, Control용액,Cath2용액, DF8용액
3. 실험 방법
(
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dry시킨다.
ⅹ) Pellet을 TE(pH 8.0) with RNase(final 20μg/ml) 50μl에 녹인 후 37℃에서 30분간 incubation한 후 -20℃에 보관한다.
☞ 분리된 DNA의 정량
ⅰ) UV spectrophotometer를 10분 정도 미리 켜두어 발생되는 자외선을 안정화 시킨다.
ⅱ) 실험에서 얻은 DNA 용
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내려오면 자외선 하에서 확인한다.
『EtBr는 DNA 이중나선에 삽입되어 UV에 노출 시 형광을 나타내는 물질로 이를 통해 DNA의 위치확인 및 정량을 할 수 있다.(DNA와 붙어있을 때와 그렇지 않을 때의 UV에 대한 fluorecence의 life time의 차이가 있기 때
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r 4 (10x)
2㎕
Mini-prep한 plasmid
10㎕
D.W
7㎕
Nde I
0.5㎕
Nco I
0.5㎕
2.1% agarose gel에서 전기영동하여 mini-prep한 plasmid의 size가 정확한지 확인한다.
(이 때, loading dye가 들어있지 않기 때문에, 반드시 DNA loading dye(6x)를 첨가한 후에, gel에 loading한다.)
※실험
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Plasmid DNA의 크기를 확인 한다.
5. 참고 문헌
- https://cafe.naver.com/biofactacademy/76 (바이오팩트 공식 학술카페) - Plasmid prep
- [네이버 지식백과] 플라스미드 [Plasmid] (분자·세포생물학백과)
- 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON, 186pag
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