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시약으로 처리하면 염색되므로 자외선 하에서 DNA를 직접 관찰할 수 있다
단점
·실험준비가 까다롭다
1R-3. Agarose gel과 Polyacrylamid gel의 polymerization 과정을 설명하라.
1R-4. 0.8%의 Agarose gel을 사용하여 크기는 같지만 여러 가지 다른 형태의 DNA를 분
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1. Date
14 April 2006
2. Subject
단백질 정량, SDS-PAGE의 원리 및 SDS-polyacrylamide gel의 제조
3. Object
전기영동에 관한 원리 및 기본적인 지식을 익히고, 지난 실험에서 만들어 놓은 Buffer 용액들을 정량 하여 Gel-loading sample을 제작한다. 또한 SDS-po
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Gel-loading buffer(/L)
50mM Tris-Cl(pH 6.8)
14.4mM 2-mercaptoethanol
Disulfide bond 파괴
Protein의 unfolding
2% SDS
Protein folding 방지
0.1% bromophenol blue
전개시 표시를 해주는 dye
10% glycerol
용액에 잠기게 함
염색액(/L)
1g Coomassie Blue R-250
450ml methanol
450 H2O
100ml glacial acetic ac
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마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
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gel은 5%이기 때문에 size에 영향 없이 내려온다. Running gel은 좀 더 dense한 8%이기 때문에 size 크기에 따라 내려오는 속도가 다르다.
- APS는 4℃에 보관한다.
- 유리판에 SDS PAGE Gel을 넣어줄 때 한쪽 벽면 끝에서 기포가 생기지 않도록 loading해준다. lo
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